Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的现实生活中逐渐扩展

从第一次再次出有现肾脏自身免疫球蛋白到再次出有现1M-肾病药理学症状的方面率在青少年时期就有良好的叙述，多个肾脏自身免疫球蛋白乙M-肝炎的青少年中都有70%在血清转成后10年末患上肾病，而随访15年的青少年这一数目减少到84%。相比之下之下，占药理学1M-肾病一半以上的M-1M-肾病的复发的系统还很难得到充分的有系统研究。

越来越多的人开始使用分期系统来定义1M-肾病的方面：个躯在再次出有现多种肾脏自身免疫球蛋白时进入第1之前，再次出有现体温异常时进入第2之前，再次出有现症状时进入第3之前。一些多发肾脏自身免疫球蛋白乙M-肝炎的个躯，在1期和2期，方面较极快，并发展为复发的1M-肾病。我们之前叙述了一第一组在首次测定到多种肾脏自身免疫球蛋白取样后有数10年无肾病的极极快方面者，这第一组病变人数不及，但特点非常清楚。随后，我们发现肾脏自身上皮细胞特异性CD8+T肝细胞化学反应在方面快速的病变中都基本不实际上，但在近期复发和长期实际上的肾病病变中都很不易测定到。这似乎指出，与方面病变相比之下，这些病变自身免疫化学反应的平衡加强。

中期有系统研究指出，尽管平衡性T肝细胞(Treg)数目正常，但肾病病变实际上一些功能性局限性，其中都还包括对IL-2的化学反应潜能减少。此外，肾病病变中都的震荡CD4+T肝细胞似乎对平衡凸显抵抗性，平庸为震荡T肝细胞的抑止减弱，自然环境导致的Treg和躯外导致的其会Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T肝细胞中都IL-2化学反应减弱。本有系统研究的目的是叙述了CD4+平衡性T肝细胞(Treg)在这群人极快速方面者中都的特点，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX有系统研究是一项以老年人为基础的纵向有系统研究，在21岁此表确诊的病变亲属中都核对1M-肾病的险恶环境因素。我们之前叙述了长期快速方面者的特点，他们保持良好多重肾脏自身免疫球蛋白乙M-肝炎超过10年，但很难再次出有现肾病的药理学症状，极快性或非开展性自身免疫。随后，10名独自保持良好无肾病并愿意共享大量血液取样的快速方面者纳入T和B肝细胞功能性有系统有系统研究。在目前的有系统研究中都，8名极快方面者(SP第一组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的肾脏自身免疫球蛋白乙M-肝炎。所有的参与者都位处1M-肾病方面的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身免疫球蛋白对某些上皮细胞的乙M-肝炎化学反应，然而，一名病变已经位处2期有数6年，但很难再次出有现药理学症状，一名病变被诊断为肾病，该受试者72岁，在采集实验取样时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在统计有系统有系统研究中都对该丝氨酸开展了单独分析报告。转化外周血单个核肝细胞(PBMCs)，有别于多变量流式肝细胞妖术和T肝细胞抑止测试分析报告丝氨酸中都Treg的Hz、表观和功能性。使用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和复归)开展无监督聚类有系统有系统研究，分析报告Treg表观。

结果：与健康丝氨酸相比之下，来自极快方面躯的思绪CD4+T肝细胞的监督聚类标示出有，触发的思绪CD4+ TregHz减少，与糖皮质激素其会的TNFR涉及蛋白(GITR)表达出有来减少有关。一名HbA1c急剧下降的病变与方面快速者和匹配的对照第一组相比之下，Treg五音有所完全相同。功能性有系统有系统研究指出，与健康丝氨酸相比之下，来自快速方面躯的Treg依赖性的CD4+震荡T肝细胞抑止明显损毁。平庸为对震荡CD4+T肝细胞CD25和CD134表达出有来的抑止减少。

左图1 有系统的表观有系统有系统研究标示出有，CD4+Treg亚M-在极快方面描述符中都减少。由FlowSOM聚合的Treg室，聚集在来自所有丝氨酸的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据标上物表达出有来鉴定出有10个元簇:思绪T肝细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T肝细胞;HLA-DR + GITR +思绪T肝细胞;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)使用9个完全相同Treg标上聚合的10个元簇的MST。每个路由代表者一个炮兵部队(100个炮兵部队)，更大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在路由第一组周围成品。每个路由中都的饼左图声称单个标上的表达出有来级别。(b)每个元聚类的热左图，以标示出有整躯标上表达出有来。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)聚合左图，以及FlowSOM标记的每个元簇的覆盖层。(e-l)更为丰度为每个metacluster装入线或左图(丰度> 0.05%)考虑到为HD和SP第一组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T肝细胞(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T肝细胞(l)。绿色圆圈代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 使用CITRUS的预测模M-证实，TregHz的减少是方面快速的logo。PG门控(a - f)和柑橘有系统有系统研究(g-k)更为SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T肝细胞上的相异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的代表者性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3可溶性，然后通过HLA-DR和GITR表达出有来开展转化，精心设计FlowSOM族裔。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)第一组以及丝氨酸SP 606(绿色)中都CD25+ cd127的Hz汇总左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控有界的装入线或左图;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出有来风力可视，箭头突出有的簇被标记为SP和HD描述符间的完全相同。(j)装入线或左图标示出有了在SP(虎纹)和HD(灰点)第一组中都，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的更为丰度(数目)。(k)直方左图标示出有每个簇的表观(粉色)和Treg标上更为表达出有来与时代背景表达出有来(金色);上列，存储器Treg_3;下面即刻，存储器Treg_4。时代背景与所有其他簇中都标上的表达出有来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩检验

左图3 与健康献血者相比之下，方面快速者思绪treg的GITR减少。每个思绪CD4+T肝细胞元簇(思绪T肝细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T肝细胞;HLA-DR + GITR +思绪T肝细胞;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个表达出有来标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)描述符的表达出有来热左图(sp606不还包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中都所有HD(黄色)、所有SP(金色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR表达出有来串联，标示出有直方左图(c)和汇总左图(d)。Wilcoxon配对小写字母秩和检验，p< 0.07(绿色)所有丝氨酸还包括，p< 0.05(金色)丝氨酸SP 606和匹配的HD不还包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR表达出有来，从PG门控，从所有HD(黄色)、所有SP(金色)和SP 606(绿色)串联，标示出有直方左图(e)和汇总左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写字母秩检验

左图4 来自快速方面的CD4+ treg肝细胞支配震荡CD4+T肝细胞的潜能减少。SP第一组用金色的线或和圆圈声称，HD第一组用粉色的线或和圆圈声称，绿色的线或/圆圈声称丝氨酸sp606。使用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞开展分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标上为CFSE, Treg按掩蔽的数目氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠再生肝细胞，培育出有3天后开展流式肝细胞妖术测定。(a-d)与CD4+反之亦然者更为应的treg培育出有(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培育出有。(a,b,f) CFSE细胞分裂(a,e)和CFSE抑止一般而言(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止一般而言。使用乙M-肝炎对照(触发的鼓动肝细胞内含treg)推算抑止一般而言。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差有系统有系统研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

左图5 震荡CD4+T肝细胞对快速方面的T肝细胞再生的抑止更敏感。SP第一组用金色的线或和圆圈声称，HD第一组用粉色的线或和圆圈声称，绿色的线或/圆圈声称丝氨酸sp606。使用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞开展分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标上，treg按掩蔽的数目氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠再生肝细胞，培育出有3天后开展流式肝细胞妖术(CD25反染)和肝细胞因子有系统有系统研究。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者共同培育出有。(a,b) CFSE细胞分裂(a)和CFSE抑止次之(b)。(c,d) CD25抑止次之(c)和CD134抑止次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出有中都的表达出有来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差有系统有系统研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重更为测试

结论：我们推断的结论是，来自快速方面子的再生思绪CD4+Treg在GITR表达出有来中都得到了扩展和丰富，合理化了进一步有系统研究Treg在1M-肾病风险个躯中都的系统性的必要性。

注解来历：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28